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酶的催化活性测定分析

在进行酶的催化活性测定分析前,先了解下酶的定义

酶活单位最初是由第一个发现酶并对酶进行描述的研究者来定义的。因此在一些较早的 文献中,酶的活性以任意各种形式来表示,如吸光度的变化、还原基团的增加,以mg 或µg 表示的被转化底物的数量。这些参数和各种时间单位,如1min、30min 或1h。

1961 年,世界生物化学协会酶学委员会用国际单位U 来定义酶的活性,定义为在优化 的标准条件下,1U 即每分钟催化1mol 的底物的量。 有关酶基本的国际单位(SI),世界临床化学家协会数量和单位专家小组以及国际理论 和应用化学联合会临床化学数量和单位委员会定义了一个基本单位,katal,定义为测定体系 中,每秒钟催化1mol 的转化反应速率所需要的酶的数量,但这个单位并不常用。 每一次测定中必须标明温度。通常,在0~40℃范围内,温度每提高10℃酶催化反应的 速率会变为2 倍。而为获得可重复性的结果,必须精确控制温度,并保持其恒定。 但由于许多实际的原因,对于许多酶反应的监控并不能够通过消耗的底物或生成的产物 的化学计量来实现。因此,对于某一特定的酶,它的催化活性也许根本不能用国际单位来表 示。 在分子生物学中,大部分的酶的单位定义相当随意。例如,限制性内切酶(E.C.3.1.21.3-5) 的酶活定义为:在一定的温育条件下,酶使DNA 某一特定键断裂,在电泳后可以检测到的 精确数量(通常1g)的DNA 时酶的催化活性。 还有其他一些定义这些酶活的参数,如以微克、纳摩尔、吸光度单位或者是碱基对的数 目来表示的核酸降解以及核苷在核酸分子中的结合,由于一些实际的原因,不同的时间周期 如1min、10min 、30min 或60min 被选作参考。

胆固醇酯酶

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酶作为生物催化剂,提高了反应的速率或允许该反应进行。
因此,可以检测底物的转 化率υ 来确定酶的催化活性。
酶动力学的各个方程中,底物的浓度保持在一个远远高于米氏常数的水平上,这样, 所有的酶都被底物所饱和,反应以恒速即最大速率进行。因此,酶的催化活性与所用的酶量 线性相关。在酶的活性的测定中,往往要设法达到这一条件。

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