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荧光光度法测定影响荧光强度的外部因素

荧光光度法测定影响荧光强度的外部因素

1)温度 温度降低,荧光效率和荧光强度升高。

2)溶剂 随着溶剂的极性的增加,荧光物质的π→π* 跃迁几率增加,荧光强度将增强,荧光波长也 发生红移;溶剂粘度降低,荧光强度降低;溶 剂应达到足够的纯度。 化学工程与现代材料学院

3)pH值 ?具酸或碱性基团的荧光物质,在不同pH值时,其 结构可能发生变化,因而荧光强度将发生改变。 NH3+ OHH+ NH2 OHH+ NH- ?利用金属离子与有机试剂生成配合物进行测定金 属离子时,配合物的稳定性和组成受溶液pH值影 响较大,从而影响到它们的荧光性质。 Ga3++邻-二羟基偶氮苯 Ga3++邻-二羟基偶氮苯 化学工程与现代材料学院 pH 3~4 pH 6~7 1:1配合物(产生荧光) 1:2配合物(不产生荧光)

4)散射光 瑞利散射光(Rayleigh scattering light):光子与物 质分子发生弹性碰撞,不发生能量交换,运动方 向改变;λ瑞利光=λ入射光 拉曼散射光(Raman scattering light) :光子与物 质分子发生非弹性碰撞,发生能量交换,运动方 向改变;λ拉曼光≠λ入射光 消除方法:选择适当的激发波长 化学工程与现代材料学院 448 320 a.强度 360 激发 320nm 硫酸奎宁 448 350 激发 350nm 硫酸奎宁 b.强度 320 激发 320nm 0.1mol/L硫酸 360 350 激发 350nm 0.1mol/L硫酸 400 硫酸奎宁在不同激发波长下的荧光

(a)与拉曼光谱(b) 化学工程与现代材料学院 在不同波长激发光下主要溶剂的拉曼光波长(nm) 溶剂 水 乙 醇 环己烷 CCl4 CHCl3 248 271 267 267 — — 激发光(nm) 313 365 405 350 416 469 344 409 459 344 408 458 320 375 418 346 410 461 436 511 500 499 450 502 化学工程与现代材料学院

5) 荧光熄灭 荧光熄灭(荧光猝灭):荧光物质分子与溶剂分 子或其他溶质分子的相互作用引起荧光强度降低 的现象称为荧光熄灭。 荧光熄灭剂:能引起荧光熄灭的物质。 导致荧光熄灭的原因: ?碰撞猝灭 M+hv→M*,M*+Q → M+热 ?静态猝灭 M+Q → MQ 非荧光物质 ?转入三重态的猝灭 三重态 ?荧光物质的自猝灭 荧光物质浓度较高 ?氧的熄灭作用 化学工程与现代材料学院 荧光熄灭法: 荧光物质加入某种熄灭剂后,其荧 光强度的减少与荧光熄灭剂的浓度呈线性关系, 可用于测定熄灭剂的含量,这种方法称为荧光熄灭法。

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