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过氧化氢酶的活性测定

过氧化氢酶的活性测定分为化学测定法和光度法两种:

一、化学测定法:高锰酸钾滴定法,碘量法。

二、光度法:紫外分光光度法,荧光分析法,化学发光法。 电化学法:极谱氧电极法,电流测定法,电泳一染色法。 放射化学测定法。 简易气量测定法。

具体测定如下:

高锰酸钾滴定法 : 过氧化氢酶(CAT)属于血红蛋白酶,含有铁,它能催化过氧 化氢分解为水和分子氧,在此过程中起传递电子的作用,过氧 化氢则既是氧化剂又是还原剂。 据此,可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。 在反应系统中加入一定量(反应过量)的H2O2溶液,经酶促反 应后,用标准高锰酸钾溶液(在酸性条件下)滴定多余的H2O2 。  即可求出消耗的H2O2的量。  酶活性用每克鲜重样品1min内分解H2O2的毫克数 表示: 酶活(mgH2O2/gFW·min)= 式中 A—对照KMnO4滴定毫升数; B—酶反应后KMnO4滴定毫升数; VT—酶液总量(ml); V1—反应所用酶液量(ml); W—样品鲜重(g); 1.7—1ml 0.1mol/L的KMnO4相当于 1.7mg H2O2。

紫外分光光度法 : H2O2在240nm波长下有强烈吸收,过氧化氢酶能分解过氧 化氢,使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低。根据 测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。 以1min内A240减少0.1的酶量为1个酶活单位(u)。 过氧化氢酶活性(u/gFW/min)= 式中 A240 = AS0- AS0—加入煮死酶液的对照管吸光值; AS1, AS2—样品管吸光值; Vt—粗酶提取液总体积(ml); V1—测定用粗酶液体积(ml); FW—样品鲜重(g); 0.1—A240每下降0.1为1个酶活单位(u); t—加过氧化氢到最后一次读数时间(min)。

方法比较: 研究认为,化学滴定法重复性差、紧密度 低、操作繁琐、检测线低,不适于大批量 的样品测定。其优点是不需要任何特殊的 仪器,适用性比较广泛。 紫外分光光度法具有重现性好,操作简单、 快速、检测线相对较低得到优点。但是对 于测定底物或产物改变量方面不太准确。

过氧化氢酶的活性测定总结:

综上所述,过氧化氢酶活性测定的方法大都基于 过氧化氢酶催化过氧化氢的分解反应:根据反应 生成的氧气的量、反应剩余的过氧化氢的量或根 据反应时的电子的转移及电流的变化等。同时, 影响测定结果的因素很多,如过氧化氢的浓度、 酸度、温度及重金属的含量等;并且各种方法的 准确性和灵敏度也有一定差异。因此,在测定CAT 活性时,应该根据具体组织种类及测量要求选择 适合的测定的方法。

酶制剂

因酶制剂产品众多,如:过氧化氢酶 粉末、α-葡萄糖苷酶、胆固醇酯酶 、尿酸酶、辅酶A、抑肽酶、胰凝乳蛋白酶、乙酰胆碱酯酶、弹性蛋白酶、胆固醇氧化酶 、超氧化物歧化酶、肠激酶、胆红素氧化酶、嘌呤核苷磷酸化酶、葡萄糖氧化酶、凝血酶、心肌黄酶、磷酸葡萄糖变位酶、己糖激酶、辣根过氧化物酶、葡萄糖 -6-磷酸脱氢酶、腺苷脱氨酶、核糖核酸酶、黄嘌呤氧化酶、溶菌酶等,详情进入酶制剂产品页

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